ዲቲዮትሬይቶል (DTT) በተለምዶ ጥቅም ላይ የሚውል የመቀነስ ወኪል ሲሆን አዲሱ አረንጓዴ ተጨማሪ በመባልም ይታወቃል። ሁለት የሜርካፕታን ቡድኖች (-SH) ያሉት ትንሽ ሞለኪውላዊ ኦርጋኒክ ውህድ ነው። በመቀነስ ባህሪያቱ እና መረጋጋት ምክንያት፣ DTT በባዮኬሚስትሪ እና በሞለኪውላር ባዮሎጂ ሙከራዎች በስፋት ጥቅም ላይ ይውላል።
የዲቲቲ ዋና ሚና በፕሮቲኖች እና በሌሎች ባዮሞለኪውሎች ውስጥ የዲሰልፋይድ ቦንዶችን መቀነስ ነው። የዲሰልፋይድ ቦንዱ የፕሮቲን ማጠፍ እና መረጋጋት አስፈላጊ አካል ነው፣ ነገር ግን በተወሰኑ የሙከራ ሁኔታዎች፣ ለምሳሌ ሊቀንስ የሚችል የኤስዲኤስ-ፒኤጅ ትንተና፣ የፕሮቲን ውህደት እና ማጠፍ ባሉ፣ የዲሰልፋይድ ቦንዱን ከሁለት ቲዮል ቡድኖች ጋር መቀነስ የፕሮቲንን የቦታ መዋቅር ለመፈታት አስፈላጊ ነው። ዲቲቲ ከዲሰልፋይድ ቦንዶች ጋር ምላሽ ለመስጠት ወደ ሜርካፕታን ቡድኖች ለመቀነስ ይችላል፣ በዚህም የፕሮቲንን የቦታ መዋቅር ይከፍታል እና ለመተንተን እና ለማዛባት ቀላል ያደርገዋል።
ዲቲቲ የኢንዛይም እንቅስቃሴን እና መረጋጋትን ለመጠበቅም ሊያገለግል ይችላል። በአንዳንድ ኢንዛይሞች-ካታላይዝድ ግብረመልሶች ውስጥ የኢንዛይሙ እንቅስቃሴ በኦክሲዳንት ሊቀንስ ይችላል። ዲቲቲ ከኦክሲዳንቶች ጋር ምላሽ ለመስጠት ወደ ምንም ጉዳት የሌላቸው ንጥረ ነገሮች በመቀነስ የኢንዛይሙን እንቅስቃሴ እና መረጋጋት ይጠብቃል።
እንደ β-ሜርካፕቶኤታኖል (β-ME) ካሉ ባህላዊ የመቀነስ ወኪሎች ጋር ሲነጻጸር፣ DTT ደህንነቱ የተጠበቀ እና የበለጠ የተረጋጋ የመቀነስ ወኪል እንደሆነ ይታሰባል። በውሃ መፍትሄ ውስጥ የተረጋጋ ብቻ ሳይሆን በከፍተኛ ሙቀት እና በአሲድ-ቤዝ ሁኔታዎች ውስጥ የመቀነስ ባህሪያቱንም ይጠብቃል።
የዲቲቲ አጠቃቀም በአንጻራዊነት ቀላል ነው። በአጠቃላይ ዲቲቲ በተገቢው ቋት ውስጥ ይሟሟል ከዚያም ወደ የሙከራ ስርዓቱ ይታከላል። የዲቲቲ ምርጥ ክምችት በተወሰነው ሙከራ መሰረት መወሰን አለበት፣ እና በአጠቃላይ በ0.1-1mM ክልል ውስጥ ጥቅም ላይ ይውላል። ዝቅተኛ ክምችት በሴል እድገት ላይ አሉታዊ ተፅእኖዎችን ሊቀንስ እና የታለሙ ፕሮቲኖች ከመጠን በላይ በመገለጥ ምክንያት ሳይቶቶክሲክነትን ሊቀንስ ይችላል። ከፍተኛ ክምችት ከመጠን በላይ የሴል ሜታቦሊዝም ጫና ሊያስከትል ይችላል፣ ይህም የሴል እድገትን እና የመግለጫ ቅልጥፍናን ሊጎዳ ይችላል።
ምርጡን ክምችት የሚወስንበት መንገድ የIPTG ኢንዳክሽን ሙከራዎችን በተለያዩ ክምችቶች በማካሄድ የዒላማውን ፕሮቲን የመግለፅ ደረጃ መገምገም ነው። አነስተኛ ደረጃ የባህል ምርመራዎች የተለያዩ የIPTG ክምችቶችን (ለምሳሌ 0.1 mM፣ 0.5 mM፣ 1 mM፣ ወዘተ) በመጠቀም ሊከናወኑ ይችላሉ፣ እና በተለያዩ ክምችቶች ላይ ያለው የመግለፅ ውጤት የዒላማውን ፕሮቲን የመግለፅ ደረጃ (ለምሳሌ የዌስተርን ብሎት ወይም የፍሎረሰንስ ዲቴክሽን) በመለየት ሊገመገም ይችላል። በሙከራ ውጤቶቹ መሠረት፣ ምርጡን የመግለፅ ውጤት ያለው ክምችት እንደ ምርጥ ክምችቱ ተመርጧል።
በተጨማሪም፣ በተመሳሳይ የሙከራ ሁኔታዎች ውስጥ በብዛት ጥቅም ላይ የሚውለውን የ IPTG የማጎሪያ ክልል ለመረዳት እና ከዚያም በሙከራ ፍላጎቶች መሰረት ለማመቻቸት እና ለማስተካከል ተገቢውን ጽሑፍ ወይም የሌሎች ላቦራቶሪዎችን ተሞክሮ መመልከት ይችላሉ።
ምርጡ ክምችት በተለያዩ የአገላለጽ ስርዓቶች፣ ኢላማ ፕሮቲኖች እና የሙከራ ሁኔታዎች ላይ በመመስረት ሊለያይ እንደሚችል ልብ ማለት አስፈላጊ ነው፣ ስለዚህ በእያንዳንዱ ጉዳይ ላይ ማመቻቸት የተሻለ ነው።
ባጭሩ፣ DTT በፕሮቲኖችና በሌሎች ባዮሞለኪውሎች ውስጥ የዲሰልፋይድ ትስስርን ለመቀነስ እና የኢንዛይም እንቅስቃሴንና መረጋጋትን ለመጠበቅ ጥቅም ላይ ሊውል የሚችል የተለመደ የመቀነሻ ወኪል ነው። በባዮኬሚስትሪ እና በሞለኪውላር ባዮሎጂ ሙከራዎች በስፋት ጥቅም ላይ ውሏል።
የፖስታ ሰዓት፡- ሴፕቴምበር 28-2023