Dithiothreitol (DTT) በተለምዶ ጥቅም ላይ የሚውለው የመቀነስ ወኪል ነው፣ በተጨማሪም አዲሱ አረንጓዴ ተጨማሪ በመባልም ይታወቃል።ሁለት የመርካፕታን ቡድኖች (-SH) ያለው ትንሽ ሞለኪውላዊ ኦርጋኒክ ውህድ ነው.በመቀነሱ ባህሪያት እና መረጋጋት ምክንያት, ዲቲቲ በባዮኬሚስትሪ እና በሞለኪውላር ባዮሎጂ ሙከራዎች ውስጥ በሰፊው ጥቅም ላይ ይውላል.
የዲቲቲ ዋና ሚና በፕሮቲኖች እና በሌሎች ባዮሞለኪውሎች ውስጥ የዲሰልፋይድ ቦንዶችን መቀነስ ነው።የዲሰልፋይድ ቦንድ የፕሮቲን መታጠፍ እና መረጋጋት አስፈላጊ አካል ነው ፣ ግን በተወሰኑ የሙከራ ሁኔታዎች ፣ ለምሳሌ ሊቀንስ በሚችል የኤስዲኤስ-ገጽ ትንታኔ ፣ ፕሮቲን እንደገና መቀላቀል እና ማጠፍ ፣ የቦታ መዋቅርን ለመፍታት የዲሰልፋይድ ቦንድ ከሁለት የቲዮል ቡድኖች ጋር መቀነስ አስፈላጊ ነው። ፕሮቲን.ዲቲቲ ከዲሰልፋይድ ቦንዶች ጋር ምላሽ በመስጠት ወደ ሜርካፕታን ቡድኖች እንዲቀንስ ስለሚያደርግ የፕሮቲን የቦታ አወቃቀሩን ይከፍታል እና ለመተንተን እና ለመቆጣጠር ቀላል ያደርገዋል።
ዲቲቲ የኢንዛይም እንቅስቃሴን እና መረጋጋትን ለመጠበቅ ጥቅም ላይ ሊውል ይችላል.በአንዳንድ ኢንዛይም-ካታላይዝድ ምላሾች የኢንዛይም እንቅስቃሴ በኦክሳይድ ሊቀንስ ይችላል።ዲቲቲ ከኦክሲዳተሮች ጋር ምንም ጉዳት የሌላቸው ንጥረ ነገሮች እንዲቀንሱ ሊያደርግ ይችላል, በዚህም የኢንዛይም እንቅስቃሴን እና መረጋጋትን ይከላከላል.
እንደ β-mercaptoethanol (β-ME) ካሉ ባህላዊ ቅነሳ ወኪሎች ጋር ሲነጻጸር DTT ይበልጥ አስተማማኝ እና የተረጋጋ የመቀነስ ወኪል ተደርጎ ይቆጠራል።በውሃ ፈሳሽ ውስጥ የተረጋጋ ብቻ ሳይሆን በከፍተኛ ሙቀት እና በአሲድ-መሰረታዊ ሁኔታዎች ውስጥ የመቀነስ ባህሪያቱን ይጠብቃል.
የዲቲቲ አጠቃቀም በአንጻራዊነት ቀላል ነው.በአጠቃላይ, DTT በተገቢው ቋት ውስጥ ይሟሟል እና ከዚያም ወደ የሙከራ ስርዓት ይጨመራል.የዲቲቲ ከፍተኛ ትኩረትን በተለየ ሙከራ መሰረት መወሰን ያስፈልጋል, እና በአጠቃላይ በ 0.1-1mM ውስጥ ጥቅም ላይ ይውላል.ዝቅተኛ ትኩረት በሴሎች እድገት ላይ አሉታዊ ተፅእኖዎችን ሊቀንስ እና በታለመላቸው ፕሮቲኖች ከመጠን በላይ በመጨመራቸው ምክንያት ሳይቶቶክሲካዊነትን ሊቀንስ ይችላል።ከፍተኛ ትኩረትን ከመጠን በላይ የሴል ሜታቦሊክ ሸክም ሊፈጥር ይችላል, ይህም የሕዋስ እድገትን እና የመግለፅን ውጤታማነት ይነካል.
ከፍተኛ ትኩረትን የሚወስንበት መንገድ የአይፒቲጂ ኢንዳክሽን ሙከራዎችን በተለያዩ መጠኖች በማካሄድ የታለመውን ፕሮቲን አገላለጽ ደረጃ መገምገም ሊሆን ይችላል።የአነስተኛ ደረጃ የባህል ፈተናዎች የተለያዩ የአይፒቲጂ ስብስቦችን (ለምሳሌ 0.1 ሚሜ፣ 0.5 ሚሜ፣ 1 ሚሜ፣ ወዘተ.) በመጠቀም ሊደረጉ የሚችሉ ሲሆን በተለያየ መጠን ያለው የገለጻ ውጤት ሊገመገም የሚችለው የታለመውን ፕሮቲን (ለምሳሌ ምዕራባዊ) የመግለጫ ደረጃ በመለየት ነው። ነጠብጣብ ወይም የፍሎረሰንት መለየት).በሙከራ ውጤቶቹ መሰረት, ምርጥ የመግለጫ ውጤት ያለው ትኩረት እንደ ምርጥ ትኩረት ተመርጧል.
በተጨማሪም ፣በተመሳሳይ የሙከራ ሁኔታዎች ውስጥ በተለምዶ ጥቅም ላይ የዋለውን የአይፒቲጂ ማጎሪያ ክልልን ለመረዳት እና ከዚያ በሙከራ ፍላጎቶች መሠረት ማመቻቸት እና ማስተካከል ከፈለጉ ተዛማጅ ጽሑፎችን ወይም የሌሎችን የላቦራቶሪዎችን ተሞክሮ ማየት ይችላሉ።
በጣም ጥሩው ትኩረት እንደ የተለያዩ የገለፃ ስርዓቶች ፣ የታለሙ ፕሮቲኖች እና የሙከራ ሁኔታዎች ሊለያይ እንደሚችል ልብ ሊባል የሚገባው ጉዳይ ነው ፣ ስለሆነም በእያንዳንዱ ሁኔታ ማመቻቸት የተሻለ ነው።
በማጠቃለያው ዲቲቲ በፕሮቲን እና በሌሎች ባዮሞለኪውሎች ውስጥ ያለውን የዲሰልፋይድ ቦንዶችን ለመቀነስ እና የኢንዛይም እንቅስቃሴን እና መረጋጋትን ለመጠበቅ የሚያገለግል የመቀነስ ወኪል ነው።በባዮኬሚስትሪ እና በሞለኪውላር ባዮሎጂ ሙከራዎች ውስጥ በሰፊው ጥቅም ላይ ውሏል.
የፖስታ ሰአት፡ ሴፕቴምበር-28-2023